期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第三军医大学主办，公开发行的专业性学术期刊。自1985年创刊以来，先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊，并被美国化学文摘(CA)、俄罗斯文摘（AJ）收录。适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。
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- 杂志名称：免疫学杂志
- 主管单位：第三军医大学
- 主办单位：第三军医大学,中国免疫学会
- 国际刊号：1000-8861
- 国内刊号：51-1332/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中国科协优秀期刊三等奖期刊收录：
IRF3shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应
涂文娟；朱彤；谈志丽；刘亮明
关键词：干扰素调节因子3, 短发夹RNA, 腺病毒, 病毒包装, RAW264.7细胞
摘要：目的 重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响.方法 采用酶切和连接方法构建pAdeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 shRNA质粒;借助AdMaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测.结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入pAdeno-U6-CMV-EGFP质粒Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 mRNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响.结论 成功构建并包装了IRF3shRNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 mRNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响.
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