期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第三军医大学主办，公开发行的专业性学术期刊。自1985年创刊以来，先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊，并被美国化学文摘(CA)、俄罗斯文摘（AJ）收录。适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。
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首页>免疫学杂志
- 杂志名称：免疫学杂志
- 主管单位：第三军医大学
- 主办单位：第三军医大学,中国免疫学会
- 国际刊号：1000-8861
- 国内刊号：51-1332/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中国科协优秀期刊三等奖期刊收录：
Foxp3逆转录病毒表达载体增强Treg细胞功能
何云锋；吴小候；唐伟；尹志康；蒲军；张尧
关键词：逆转录病毒, FOXP3, 质粒, Treg
摘要：目的 构建Treg (regulatory T cell)细胞关键转录因子Foxp3逆转录病毒表达载体,并将其转染和稳定表达于Treg细胞中,检测Treg细胞因子改变.方法 设计编码区全长序列引物,HiFi PCR (high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)扩增编码区序列.胶回收PCR产物,将PCR产物与线性化pSCV-BsdRFP质粒连接并测序鉴定.将pSCV-BsdRFP质粒电转入骨架质粒BJ5183,将其转染293病毒包装细胞体系,包装病毒.反复感染4次得到高滴度pSCV-BsdRFP-Foxp3逆转录病毒液.将此高表达逆转录病毒命名为pSCV-BsdRFP-Foxp3,感染大鼠脾脏来源Treg细胞,G418筛选稳定表达细胞株.ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)检测Treg细胞因子IL-10和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改变.结果 HiFiPCR得到编码区全长序列DNA,连接到pSCV-BsdRFP质粒,测序鉴定扩增序列符合编码区序列.pSCV-BsdRFP质粒成功转染BJ5183后,转染293病毒包装体系,可见感染细胞有红色荧光表达.pSCV-BsdRFP-Foxp3病毒感染Treg细胞稳定表达后,可见细胞内红色荧光表达.IL-10和TGF-β表达增强.结论 成功构建Foxp3高表达逆转录病毒pSCV-BsdRFP-Foxp3,转染大鼠脾脏来源Treg细胞并得到稳定高表达Foxp3的Treg细胞.pSCV-BsdRFP-Foxp3可增强Treg细胞分泌IL-10和TGF-β功能.
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