期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第三军医大学主办，公开发行的专业性学术期刊。自1985年创刊以来，先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊，并被美国化学文摘(CA)、俄罗斯文摘（AJ）收录。适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。
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首页>免疫学杂志
- 杂志名称：免疫学杂志
- 主管单位：第三军医大学
- 主办单位：第三军医大学,中国免疫学会
- 国际刊号：1000-8861
- 国内刊号：51-1332/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中国科协优秀期刊三等奖期刊收录：
二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定
张晋霞；姜浩武；亢中奎；潘磊；王金胜；刘羿辰；邓宁
关键词：bFGF, ds-Diabody, 毕赤酵母, 肺癌细胞
摘要：目的 为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性.方法 将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化.间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用.结果 成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1％甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L.SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右.通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95％以上.ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合.CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,大抑制率为43.4％.划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移.结论 研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性.
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