期刊简介
本刊是由中国免疫学会和第三军医大学主办，公开发行的专业性学术期刊。自1985年创刊以来，先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊，并被美国化学文摘(CA)、俄罗斯文摘（AJ）收录。适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。
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首页>免疫学杂志
- 杂志名称：免疫学杂志
- 主管单位：第三军医大学
- 主办单位：第三军医大学,中国免疫学会
- 国际刊号：1000-8861
- 国内刊号：51-1332/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中国科协优秀期刊三等奖期刊收录：
B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究
王旭；逄越；王惠国；马彪；刘庆平；李文哲
关键词：PAX5, BSAP, 原核表达
摘要：目的 克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备.方法 从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的 蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western b1ot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清.利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况.结果 克隆得到的目的 基因片段大小与预期相符,测序结果 与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的 蛋白.Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上.兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1:256 000.免疫荧光染色结果 显示Raji细胞中Pax5高表达.结论 本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据.
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