期刊简介

               本刊是由中国免疫学会和第三军医大学主办,公开发行的专业性学术期刊。自1985年创刊以来,先后被确定为国家中文核心期刊、中国科技论文统计源期刊、中国科学引文数据库源期刊,并被美国化学文摘(CA)、俄罗斯文摘(AJ)收录。适合各级医务人员、医学生、免疫学工作者和相关学科的人员阅读。                

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  • 杂志名称:免疫学杂志
  • 主管单位:第三军医大学
  • 主办单位:第三军医大学,中国免疫学会
  • 国际刊号:1000-8861
  • 国内刊号:51-1332/R
  • 出版周期:
期刊荣誉:中国科协优秀期刊三等奖期刊收录:
免疫学杂志2005年第05期

CDR3突变提高抗TNF-α Fab段的亲和力

汪保安;陈晓穗;王琰;王欲晓;曲佳;周丽君

关键词:亲和力成熟, CDR3突变, 肿瘤坏死因子α
摘要:目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%~70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数.结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108 L/mol,较亲本抗体(0.1×108 L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100 d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率高,且对亲和力提高贡献大.测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、 6.3×108和6.5×108 L/mol,大的提高了近65倍.结论 CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力.